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什么是凝膠電泳

什么是凝膠電泳

那么下面為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于什么是凝膠電泳:

電泳是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種技術(shù),用于根據(jù)大小分離帶電分子,例如DNA。

凝膠電泳是實(shí)驗(yàn)室中常用的一種技術(shù),用于分離帶電分子,例如DNA ,RNA 和蛋白質(zhì)。根據(jù)它們的大小。

當(dāng)電流通過凝膠時(shí),帶電分子穿過凝膠。

在凝膠上施加電流,以使凝膠的一端帶正電荷,而另一端帶負(fù)電荷。

帶電分子的運(yùn)動(dòng)稱為遷移。分子向相反電荷遷移。因此,帶負(fù)電荷的分子將被拉向正末端(相反的方向吸引?。?/span>

凝膠由可滲透的基質(zhì)(有點(diǎn)像篩子)組成,當(dāng)電流通過時(shí),分子可以穿過該基質(zhì)。

較小的分子在凝膠中的遷移速度更快,因此比較大的分子遷移速度更慢,因此遷移距離更短,因此較大的分子可以遷移。結(jié)果,分子按大小分開。

凝膠電泳和DNA

電泳使您能夠區(qū)分不同長(zhǎng)度的DNA片段。

DNA帶負(fù)電,因此,當(dāng)電流施加到凝膠上時(shí),DNA會(huì)向帶正電的電極遷移。

較短的DNA鏈比較長(zhǎng)的DNA鏈穿過凝膠的速度更快,從而導(dǎo)致片段按大小順序排列。

使用染料,發(fā)熒光?標(biāo)簽還是放射性的?標(biāo)記使分離后的凝膠上的DNA可見。它們將在凝膠上顯示為條帶。

具有已知長(zhǎng)度片段的DNA標(biāo)記通常與樣品同時(shí)在凝膠中穿行。

通過將DNA樣品的條帶與DNA標(biāo)記的條帶進(jìn)行比較,可以算出樣品中DNA片段的大致長(zhǎng)度。

凝膠電泳如何進(jìn)行?

準(zhǔn)備凝膠

瓊脂糖凝膠?通常用于可視化DNA片段。用于制作凝膠的瓊脂糖濃度取決于您正在使用的DNA片段的大小。

瓊脂糖濃度越高,基質(zhì)越致密,反之亦然。較小的DNA片段在較高濃度的瓊脂糖上分離,而較大的分子需要較低濃度的瓊脂糖。

為了制備凝膠,將瓊脂糖粉與電泳緩沖液混合并加熱至高溫,直到所有瓊脂糖粉融化為止。

然后將熔化的凝膠倒入凝膠澆鑄盤中,并在一端放置一個(gè)“梳子”,以制成用于移液的孔。

凝膠冷卻并固化后(現(xiàn)在將是不透明而不是透明的),將梳子移開。

現(xiàn)在,許多人都使用預(yù)制的凝膠。

然后將凝膠放入電泳槽中,并將電泳緩沖液倒入槽中,直到覆蓋凝膠表面為止。緩沖器傳導(dǎo)電流。所用緩沖液的類型取決于樣品中DNA片段的大致大小。

準(zhǔn)備用于電泳的DNA

在電泳之前將染料添加到DNA樣品中,以增加樣品的粘度,這將防止其浮出孔,從而可以看到樣品通過凝膠的遷移。

將DNA標(biāo)記物(也稱為大小標(biāo)準(zhǔn)品或DNA階梯)裝入凝膠的**個(gè)孔中。標(biāo)記中的片段長(zhǎng)度已知,因此可用于幫助估計(jì)樣品中片段的大小。

然后將制備的DNA樣品吸移到凝膠的其余孔中。

完成此操作后,將蓋子放在電泳槽上,確保凝膠以及正負(fù)電極的方向正確(我們希望DNA跨凝膠遷移至正端)。

分離碎片

然后打開電流,使帶負(fù)電荷的DNA穿過凝膠向凝膠的正側(cè)移動(dòng)。

較短長(zhǎng)度的DNA移動(dòng)的速度快于較長(zhǎng)長(zhǎng)度的DNA,因此在運(yùn)行電流時(shí)移動(dòng)的距離更遠(yuǎn)。

DNA遷移到凝膠中的距離可以通過監(jiān)視上樣緩沖液染料的遷移來(lái)直觀判斷。

留下的電流要足夠長(zhǎng),以確保DNA片段在凝膠上移動(dòng)的距離足以將它們分開,但不要過長(zhǎng)以至于它們從凝膠末端流出。

用于按大小分離DNA片段的DNA電泳設(shè)備插圖。凝膠位于緩沖罐中。將DNA樣品置于凝膠一端的孔中,并且電流流過凝膠。帶負(fù)電荷的DNA向正電極移動(dòng)。圖片來(lái)源:Genome Research Limited

可視化結(jié)果

一旦DNA在凝膠上遷移足夠遠(yuǎn),就將電流切斷,并將凝膠從電泳槽中移出。

為了使DNA可視化,用與DNA結(jié)合的熒光染料對(duì)凝膠進(jìn)行染色,然后將其放在紫外透射儀上,該透射儀將被染色的DNA顯示為亮帶。

或者,染料可以在倒入之前與凝膠混合。

如果凝膠正確運(yùn)行,將可見DNA標(biāo)記物/大小標(biāo)準(zhǔn)品的條帶模式。

然后可以通過想象一條橫穿DNA標(biāo)記帶的水平線來(lái)判斷樣品中DNA的大小。然后,您可以通過將它們與標(biāo)記中**接近的條帶進(jìn)行匹配來(lái)估計(jì)樣品中DNA的大小。

 

顯示脫氧核糖核酸帶的例證在凝膠分離了。將DNA片段的長(zhǎng)度與包含已知長(zhǎng)度的片段的標(biāo)記進(jìn)行比較。

 

TEL:13798128437

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