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安瓿管真空冷凍干燥機操作步驟

安瓿管真空冷凍干燥機操作步驟:

冷凍干燥機是由制冷系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、電器儀表控制系統(tǒng)所組成的機器。冷凍干燥機主要部件分為干燥箱、凝結(jié)器、冷凍機組、真空泵、加熱/冷卻裝置等。冷凍干燥機(以下簡稱凍干機)就是將含水物質(zhì),先凍結(jié)成固態(tài),而后使其中的水分從固態(tài)升華成氣態(tài),以除去水分而保存物質(zhì)的方法。

在壓縮空氣干燥過程中,其冷凍干燥是通過降低壓縮空氣溫度,使壓縮空氣中的水份析出。冷凍干燥機(凍干機)的工作原理與電冰箱一樣,壓縮空氣經(jīng)過冷凍的壓縮空氣管道后,壓縮空氣溫度下降至要求的溫度,達(dá)到干燥的要求。

操作步驟如下:
好氧菌冷凍干燥管的制備
1 安瓿管準(zhǔn)備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標(biāo)簽,標(biāo)上菌號及時間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
2 保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備
保護(hù)劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護(hù)劑時,應(yīng)注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
3 凍干樣品的準(zhǔn)備
在最適宜的培養(yǎng)條件下將細(xì)胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,進(jìn)行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯(lián)合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術(shù)規(guī)程》(試行)),與保護(hù)劑混合均勻,分裝。微生物培養(yǎng)物濃度以細(xì)胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個活細(xì)胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長的毛細(xì)滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個球部。若是液體培養(yǎng)的微生物,應(yīng)離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護(hù)劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,在1-2小時內(nèi)分裝完畢并預(yù)凍。分裝時應(yīng)注意在無菌條件下操作。
4 預(yù)凍
一般預(yù)凍2小時以上,溫度達(dá)到-20℃到-35℃左右。
5 冷凍干燥
采用冷凍干燥機進(jìn)行冷凍干燥。
將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內(nèi),開始冷凍干燥,時間一般為8-20小時。
6 真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細(xì),然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
7 保藏
安瓿管應(yīng)低溫避光保藏。
8 質(zhì)量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進(jìn)行各項指標(biāo)檢查,如存活率、生產(chǎn)能力、形態(tài)變異、雜菌污染等。
厭氧菌冷凍干燥管的制備
主要程序與需氧菌操作相同,注意保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備,保護(hù)劑使用前應(yīng)在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右,脫氣后放入冷水中急冷,除掉保護(hù)劑中的溶解氧。
復(fù)蘇方法
—— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,
—— 將安瓿管頂部燒熱,
—— 用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現(xiàn)裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端,
—— 用無菌水或培養(yǎng)液溶解菌塊,使用無菌吸管移入新鮮培養(yǎng)基上,進(jìn)行適溫培養(yǎng)。

 


TEL:13798128437

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